പുതിയ കൊറോണ വൈറസ്(SARS-Cov-2) ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ്
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluഅയിര്scent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Pറോഡുക്t name 】പുതിയ കൊറോണ വൈറസ്(SARS-Cov-2) ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് (ഫ്ലൂറസെൻ്റ് RT-PCR പ്രോബ് രീതി)
【Packaging specifications 】25 ടെസ്റ്റുകൾ/കിറ്റ്
【Intended usപ്രായം】
കൊവിഡ് 19 ഉണ്ടെന്ന് സംശയിക്കുന്ന വ്യക്തികളിൽ നിന്ന് നാസോഫറിംഗിയൽ സ്വാബ്സ്, ഓറോഫറിംഗൽ (തൊണ്ട) സ്വാബ്സ്, ആൻ്റീരിയർ നാസൽ സ്വാബ്സ്, നാസൽ വാഷ്, നാസൽ ആസ്പിറേറ്റ് എന്നിവയിലെ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഗുണപരമായി കണ്ടുപിടിക്കാൻ ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നു. പുതിയ കൊറോണ വൈറസിൻ്റെ ORF1ab, N ജീനുകൾ കണ്ടെത്തുന്നത് പുതിയ കൊറോണ വൈറസ് അണുബാധയുടെ സഹായ രോഗനിർണയത്തിനും എപ്പിഡെമിയോളജിക്കൽ നിരീക്ഷണത്തിനും ഉപയോഗിക്കാം.
【Principles of the pറോസ്dure 】
നോവൽ കൊറോണ വൈറസ് (SARS-Cov-2) ORF1ab, N ജീൻ സീക്വൻസുകൾക്കായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത നിർദ്ദിഷ്ട TaqMan പ്രോബുകൾക്കും നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകൾക്കുമായി ഈ കിറ്റ് രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നു. പിസിആർ റിയാക്ഷൻ സൊല്യൂഷനിൽ 3 സെറ്റ് നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകളും ഫ്ലൂറസെൻ്റ് പ്രോബുകളും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകളും ഫ്ലൂറസെൻ്റ് പ്രോബുകളും എൻഡോജെനസ് ഹൗസ് കീപ്പിംഗ് ജീനുകൾ കണ്ടെത്തുന്നതിനുള്ള കിറ്റിൻ്റെ ആന്തരിക സ്റ്റാൻഡേർഡ് കൺട്രോളായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.
പിസിആർ റിയാക്ഷനിലെ ടാക്ക് എൻസൈമിൻ്റെ എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനത്താൽ നിർദ്ദിഷ്ട ഫ്ലൂറസെൻ്റ് അന്വേഷണം ദഹിപ്പിക്കപ്പെടുകയും ഡീഗ്രേഡ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു, അതിനാൽ റിപ്പോർട്ടർ ഫ്ലൂറസെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പും കെടുത്തിയ ഫ്ലൂറസെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പും വേർതിരിക്കപ്പെടുന്നു, അങ്ങനെ ഫ്ലൂറസെൻസ് മോണിറ്ററിംഗ് സിസ്റ്റത്തിന് ഫ്ലൂറസെൻ്റ് ലഭിക്കും. സിഗ്നൽ, തുടർന്ന് PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ്റെ സമ്പുഷ്ടീകരണ പ്രഭാവം വഴി, അന്വേഷണത്തിൻ്റെ ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ ഒരു സെറ്റ് ത്രെഷോൾഡ് മൂല്യത്തിൽ-Ct മൂല്യത്തിൽ (സൈക്കിൾ ത്രെഷോൾഡ്) എത്തുന്നു. ടാർഗെറ്റ് ആംപ്ലിക്കൺ ഇല്ലാത്ത സാഹചര്യത്തിൽ, അന്വേഷണത്തിൻ്റെ റിപ്പോർട്ടർ ഗ്രൂപ്പ് ക്വഞ്ചിംഗ് ഗ്രൂപ്പിന് അടുത്താണ്. ഈ സമയത്ത്, ഫ്ലൂറസെൻസ് അനുരണന ഊർജ്ജ കൈമാറ്റം സംഭവിക്കുന്നു, റിപ്പോർട്ടർ ഗ്രൂപ്പിൻ്റെ ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വഞ്ചിംഗ് ഗ്രൂപ്പ് കെടുത്തുന്നു, അതിനാൽ ഫ്ലൂറസൻ്റ് പിസിആർ ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ച് ഫ്ലൂറസൻ്റ് സിഗ്നൽ കണ്ടെത്താൻ കഴിയില്ല.
പരിശോധനയ്ക്കിടെ റിയാക്ടറുകളുടെ ഉപയോഗം നിരീക്ഷിക്കുന്നതിനായി, കിറ്റിൽ പോസിറ്റീവ്, നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങൾ സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു: പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളിൽ ടാർഗെറ്റ് സൈറ്റ് റീകോമ്പിനൻ്റ് പ്ലാസ്മിഡ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം വാറ്റിയെടുത്ത ജലമാണ്, ഇത് പരിസ്ഥിതി മലിനീകരണം നിരീക്ഷിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ടെസ്റ്റ് ചെയ്യുമ്പോൾ ഒരേസമയം പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളും നെഗറ്റീവ് കൺട്രോളും സജ്ജമാക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
【Main comപോണൻts 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | കോമ്പോൺents | |
നാംe | സ്പെസിഫിക്കേഷൻരൂപീകരണം | ക്വാണ്ട്ഇത് | ക്വാണ്ട്ഇത് | |
പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം | 180 μL/കുപ്പി | 1 | 1 | കൃത്രിമമായി നിർമ്മിച്ച പ്ലാസ്മിഡുകൾ, വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം |
നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം | 180 μL/കുപ്പി | 1 | 1 | വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം |
SARS-Cov-2 മിക്സ് | 358.5 μL/കുപ്പി | 1 | / | പ്രത്യേക പ്രൈമർ ജോഡികൾ, പ്രത്യേക കണ്ടെത്തൽ ഫ്ലൂറസെൻ്റ് പ്രോബുകൾ, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, ഡിസ്റ്റിൽഡ് വാട്ടർ മുതലായവ |
എൻസൈം മിക്സ് | 16.5 μL/കുപ്പി | 1 | / | ടാക്ക് എൻസൈമുകൾ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്, യുഎൻജി എൻസൈമുകൾ മുതലായവ. |
SARS-Cov-2 മിക്സ് (ലിയോഫിലിസ്ഡ്) | 25 പരിശോധനകൾ/കുപ്പി | / | 1 | പ്രത്യേക പ്രൈമർ ജോഡികൾ, പ്രത്യേക കണ്ടെത്തൽ ഫ്ലൂറസെൻ്റ് പ്രോബുകൾ, ഡിഎൻടിപികൾ, ടാക്ക് എൻസൈമുകൾ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്, ഡിസ്റ്റിൽഡ് വാട്ടർ മുതലായവ. |
2x ബഫർ | 375 μL/കുപ്പി | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം മുതലായവ. |
കുറിപ്പ്:(1) വ്യത്യസ്ത ബാച്ച് കിറ്റുകളിലെ ഘടകങ്ങൾ മിശ്രണം ചെയ്യാനോ പരസ്പരം മാറ്റാനോ കഴിയില്ല.
(2) നിങ്ങളുടെ സ്വന്തം റിയാജൻറ് തയ്യാറാക്കുക: ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റ്.
【Storage condഇതിons ഒപ്പം expiration date 】
For BST-SARS-25:ദീർഘനേരം -20±5℃-ൽ ഗതാഗതവും സംഭരിക്കുകയും ചെയ്യുക.
For BST-SARS-DR-25:ഊഷ്മാവിൽ ഗതാഗതം. -20±5℃-ൽ ദീർഘനേരം സംഭരിക്കുക.
ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ഥോ സൈക്കിളുകൾ ഒഴിവാക്കുക. സാധുത കാലയളവ് 12 മാസത്തേക്ക് താൽക്കാലികമായി സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.
നിർമ്മാണ തീയതിയും ഉപയോഗ തീയതിയും ലേബൽ കാണുക.
ആദ്യം തുറന്നതിന് ശേഷം, ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ഥോ സൈക്കിളുകൾ ഒഴിവാക്കാനും റീജൻ്റ് ഫ്രീസ് ചെയ്യാനും 1 മാസത്തിൽ കൂടുതലോ അല്ലെങ്കിൽ റീജൻ്റ് കാലയളവ് അവസാനിക്കുന്നത് വരെയോ -20±5 ° C-ൽ സൂക്ഷിക്കാം, ഏത് തീയതിയാണ് ആദ്യം വരുന്നത്. - thaw ചക്രങ്ങൾ 6 തവണയിൽ കൂടരുത്.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. ബാധകമായ സാമ്പിൾ തരം: വേർതിരിച്ചെടുത്ത ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ലായനി.
2.സാമ്പിൾ സംഭരണവും ഗതാഗതവും: 20±5℃-ൽ 6 മാസത്തേക്ക് സംഭരിക്കുക. സാമ്പിളുകൾ 6 തവണയിൽ കൂടുതൽ ഫ്രീസ് ചെയ്ത് ഉരുകുക.
【TESTing metഹോഡ്】
1.Nucleic acid extraction
വൈറൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്റ്റുചെയ്യുന്നതിന് അനുയോജ്യമായ ഒരു ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റ് തിരഞ്ഞെടുത്ത് അനുബന്ധ കിറ്റ് നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക. Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. അല്ലെങ്കിൽ തത്തുല്യമായ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കിറ്റ് നിർമ്മിക്കുന്ന ഒരു ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കലും ശുദ്ധീകരണ കിറ്റും ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
2. Reaction റീജ്nt prepഅറtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) SARS-Cov-2 മിക്സും എൻസൈം മിക്സും നീക്കം ചെയ്യുക, ഊഷ്മാവിൽ പൂർണ്ണമായി ഉരുകുക, വോർട്ടക്സ് ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ച് നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് ഹ്രസ്വമായി സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.
(2) 358.5uL SARS-Cov-2 മിക്സിൽ 16.5uL എൻസൈം മിക്സ് ചേർത്ത് മിക്സഡ് റിയാക്ഷൻ ലായനി ലഭിക്കാൻ നന്നായി കലർത്തി.
(3) വൃത്തിയുള്ള 0.2 മില്ലി പിസിആർ ഒക്ടൽ ട്യൂബ് തയ്യാറാക്കി ഒരു കിണറിന് മുകളിൽ 15uL മിക്സഡ് റിയാക്ഷൻ ലായനി ഉപയോഗിച്ച് അടയാളപ്പെടുത്തുക.
(4) 15 μL ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ലായനി, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ, നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ എന്നിവ ചേർത്ത് ഒക്ടൽ ട്യൂബ് തൊപ്പി ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം മൂടുക.
(5) തലകീഴായി മറിച്ചുകൊണ്ട് നന്നായി ഇളക്കുക, ട്യൂബിൻ്റെ അടിയിൽ ദ്രാവകം കേന്ദ്രീകരിക്കാൻ വേഗത്തിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) റിയാക്ഷൻ മിക്സ് തയ്യാറാക്കാൻ SARS-Cov-2 മിക്സിൽ ((ലിയോഫിലിസ്ഡ്) 375ul 2x ബഫർ ചേർക്കുക. പൈപ്പറ്റിംഗ് വഴി നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് ഹ്രസ്വമായി സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക. ദീർഘകാല സംഭരണം.)
(2) വൃത്തിയുള്ള 0.2 മില്ലി പിസിആർ ഒക്ടൽ ട്യൂബ് തയ്യാറാക്കി ഓരോ കിണറിനും 15μL റിയാക്ഷൻ മിക്സ് ഉപയോഗിച്ച് അടയാളപ്പെടുത്തുക.
(3) 15μL ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ലായനി, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ, നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ എന്നിവ ചേർത്ത് ഒക്ടൽ ട്യൂബ് തൊപ്പി ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം മൂടുക.
(4) തലകീഴായി മറിച്ചുകൊണ്ട് നന്നായി ഇളക്കുക, ട്യൂബിൻ്റെ അടിയിൽ ദ്രാവകം കേന്ദ്രീകരിക്കാൻ വേഗത്തിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.
3. പി.സി.ആർ ampലൈഫിcation (പ്രവർത്തന ക്രമീകരണങ്ങൾക്കായി ദയവായി ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് മാനുവൽ പരിശോധിക്കുക.)
3. 1 ഫ്ലൂറസെൻ്റ് PCR ഉപകരണത്തിൻ്റെ സാമ്പിൾ ചേമ്പറിലേക്ക് PCR 8-ട്യൂബ് സ്ഥാപിക്കുക, കൂടാതെ ലോഡിംഗ് ക്രമം അനുസരിച്ച് പരിശോധിക്കേണ്ട സാമ്പിൾ, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ, നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ എന്നിവ സജ്ജമാക്കുക.
3.2 ഫ്ലൂറസെൻസ് കണ്ടെത്തൽ ചാനൽ:
(1) ORF1ab ജീൻ FAM-ൻ്റെ ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനൽ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നു (റിപ്പോർട്ടർ: FAM, Quencher: ഒന്നുമില്ല).
(2) എൻ ജീൻ വിഐസിയുടെ ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനൽ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നു (റിപ്പോർട്ടർ: വിഐസി, ക്വഞ്ചർ: ഒന്നുമില്ല).
(3) ഇൻ്റേണൽ സ്റ്റാൻഡേർഡ് ജീൻ CY5-ൻ്റെ ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനൽ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നു (റിപ്പോർട്ടർ: CY5, Quencher: ഒന്നുമില്ല).
(4) നിഷ്ക്രിയ റഫറൻസ് ROX ആയി സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.
3.3 PCR പ്രോഗ്രാം പാരാമീറ്റർ ക്രമീകരണം:
ഘട്ടം | താപനില (℃) | സമയം | സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം | |
1 | റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രതികരണം | 50 | 15 മിനിറ്റ് | 1 |
2 | ടാക്ക് എൻസൈം സജീവമാക്കൽ | 95 | 2.5 മിനിറ്റ് | 1 |
3 | ടാക്ക് എൻസൈം സജീവമാക്കൽ | 93 | 10 സെ | 43 |
അനീലിംഗ് എക്സ്റ്റൻഷനും ഫ്ലൂറസെൻസ് ഏറ്റെടുക്കലും | 55 | 30 സെ |
സജ്ജീകരിച്ച ശേഷം, ഫയൽ സംരക്ഷിച്ച് പ്രതികരണ പ്രോഗ്രാം പ്രവർത്തിപ്പിക്കുക.
4.Results analysis
പ്രോഗ്രാം അവസാനിച്ചതിനുശേഷം, ഫലങ്ങൾ സ്വയമേവ സംരക്ഷിക്കപ്പെടുകയും ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് വിശകലനം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു. ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് ഡിഫോൾട്ട് ത്രെഷോൾഡിലേക്ക് സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.
【Explanation of test results 】
1. പരീക്ഷണത്തിൻ്റെ സാധുത നിർണ്ണയിക്കുക: പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ FAM, VIC ചാനലിന് ഒരു സാധാരണ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉണ്ടായിരിക്കണം, കൂടാതെ Ct മൂല്യം സാധാരണയായി 34-ൽ താഴെയാണ്, എന്നാൽ വ്യത്യസ്ത ഉപകരണങ്ങളുടെ വ്യത്യസ്ത പരിധി ക്രമീകരണങ്ങൾ കാരണം ഏറ്റക്കുറച്ചിലുകൾ ഉണ്ടായേക്കാം. നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ FAM, VIC ചാനൽ നോൺ-ആംപ്ലിഫൈഡ് Ct ആയിരിക്കണം. മേൽപ്പറഞ്ഞ ആവശ്യകതകൾ ഒരേ സമയം പാലിക്കണമെന്ന് സമ്മതിക്കുന്നു, അല്ലാത്തപക്ഷം ഈ പരിശോധന അസാധുവാണ്.
2. ഫല വിധി
FAM/VIC ചാനൽ | വിധി ഫലം |
Ct. 37 | സാമ്പിൾ പരിശോധന പോസിറ്റീവ് ആണ് |
37≤Ct 40 | ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് എസ് ആകൃതിയിലുള്ളതാണ്, സംശയാസ്പദമായ സാമ്പിളുകൾ വീണ്ടും പരിശോധിക്കേണ്ടതുണ്ട്; പുനഃപരിശോധനാ ഫലങ്ങൾ സ്ഥിരതയുള്ളതാണെങ്കിൽ, അത് പോസിറ്റീവ് ആയി വിലയിരുത്തപ്പെടും, അല്ലാത്തപക്ഷം അത് നെഗറ്റീവ് ആണ് |
Ct≥40 അല്ലെങ്കിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഇല്ല | സാമ്പിൾ പരിശോധന നെഗറ്റീവ് ആണ് (അല്ലെങ്കിൽ കിറ്റ് കണ്ടെത്തലിൻ്റെ കുറഞ്ഞ പരിധിക്ക് താഴെ) |
ശ്രദ്ധിക്കുക: ( 1) FAM ചാനലും VIC ചാനലും ഒരേ സമയം പോസിറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, SARS-Cov-2 പോസിറ്റീവ് ആണെന്ന് നിർണ്ണയിക്കപ്പെടുന്നു.
(2) FAM ചാനലോ VIC ചാനലോ പോസിറ്റീവും മറ്റ് ചാനൽ നെഗറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, പരിശോധന ആവർത്തിക്കണം. ഒരേ സമയം പോസിറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, അത് SARS-Cov-2 പോസിറ്റീവ് ആയി വിലയിരുത്തപ്പെടും, അല്ലാത്തപക്ഷം SARS-Cov-2 നെഗറ്റീവായി വിലയിരുത്തപ്പെടും.